ELISA試劑盒

       ELISA試劑盒安全性：

　　1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

　　2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

　　3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

　　4．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

　　5．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

　　6．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

　　7．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　8．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

　　9．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

　　10．底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

　　11．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

　　12．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

　　人白細胞介素28（ELISA）試劑盒

　　實驗條件的選擇

　　在ELISA試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

　　（1）固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　　（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

　　（3）酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

　　（4）酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。