輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒

測定原理：

根據Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。

需自備的儀器及用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體100mL ×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻待用；

試劑三：液體2mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸水， 4℃保存。

試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。

試劑七：液體25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑八：10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標準磷應用液配制：將試劑八 20倍稀釋，即取0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。

定磷劑的配制：按H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣品酶液的制備：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

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